一个细胞也能实现可靠的基因表达谱分

传统的基因表达谱分析大约需要106这个数量级的细胞,但有些研究比如干细胞确实没这么多, 怎么办?莫愁莫愁,美天旎有一个试剂盒能帮助你。

美天旎独有的µMACS™ SuperAmp试剂盒仅需极少细胞就能获得可靠的数据,从而将基因芯片分析灵敏度推到一个更高的水平。这非常适合有限的样品数量,如稀有细胞群体,激光捕获纤维切割(LCM)和小组织活体检查。

哪怕你只有1个细胞,µMACS™ SuperAmp试剂盒也能进行极其灵敏的mRNA分离、cDNA合成,并用PCR实现百万级的扩增。此外,从细胞裂解到扩增,再到标记和纯化,仅需10小时,比2T7扩增更快更简单。
它采用的是经典的MACS® 技术,利用超顺磁的oligo(dT) 磁珠来分离mRNA。首先,用裂解缓冲液裂解细胞或组织,在裂解液中加入µMACS™ SuperAmp磁珠,极其微小的磁珠立即结合到mRNA分子上。之后将裂解液上样到µ柱中,µ柱置于可加热的分选器上,进行mRNA的洗涤。MACS® 柱简化了洗涤过程,只需一步就能获得高纯度的mRNA

mRNA纯化后无需洗脱下来,可直接在柱上进行cDNA合成。该分选器是永久磁铁,可被加热到37或者42。革命性的柱内cDNA合成大大的降低了mRNAcDNA的损失。第一链合成后,不需要的组分被洗掉而cDNA留在柱内。这项独特的技术确保每个步骤如mRNA分离、cDNA合成和纯化都在同一个柱内进行,最大限度地保留了样本。因此,当起始样本数很小时,仍然可得到可靠的cDNA合成。

反转录反应经过特别优化,让所有第一链cDNA片段长度一致,降低了随后扩增的PCR偏向性。然后在所有cDNA片段的3端加尾,再进行单个引物的PCR扩增。所有转录本的PCR扩增都采用单个引物和均一的退火条件,也避免了PCR偏向性。最后,在Klenow标记反应中标记扩增的DNA片段。


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